临床意义
an DIA采集技术也将再度进化——突破每秒800Hz超高速扫描速度,结合新一代智能触发逻辑,将复杂样本的深度覆盖与数据完整性推向全新高度!(
ZT Scan DIA的核心创新在于通过四极杆的连续滑动取代传统SWATH的步进式隔离窗口(图1),传统SWATH需要逐步选择窗口质荷比(m/z)范围,并在每个窗口内采集二级碎片信号,窗口切换后需清空碰撞池,导致循环时间变长,而ZT Scan DIA通过连续滑动隔离窗口,实现无间隙的MS/MS质谱采集,循环时间仅由扫描速度决定。
四极杆(Q1)以一定的扫描速度和窗口宽度,在母离子的质量范围内滑动,并连续采集二级谱图(TOF pulses),四极杆的连续滑动导致二级碎片离子强度的时间依赖性,当四极杆通过母离子m/z时二级信号慢慢的出现,母离子m/z掉出四极杆隔离窗口时二级信号消失,形成三角形的四极杆轮廓,这一过程引入了质荷比(m/z)、信号强度(intensity)、保留时间(retention time)之外的第四维度(Q1维度),Q1三角形轮廓的顶点对应于母离子m/z。不同母离子的碎片可通过Q1轮廓区分,显著减少假阳性结果。
SCIEX OS软件中已经内置了预设好的ZT Scan DIA采集方法,无需更多的设置和优化,根据实验目的和色谱半峰宽选择正真适合的方法即可。如图2所示,750-5方法适合更高的上样量和更高的通量,750-10方法适合低上样量和相对低的通量,375-7.5方法适合中低上样量和更低的通量。
20%和cv10%蛋白数目提升超过25%,并且都要优于zeno swath dia的15min有效梯度。在纳升流速下的表现越来越明显,k562样品上样0.5ng,zt scan dia使用15min有效梯度下,蛋白鉴定数目提升超过50%,定量结果cv20%蛋白数目提升超过60%,cv10%蛋白数目提升超过100%,定量结果显著优于zeno swath dia的30min有效梯度。这些根据结果得出,zt scan dia使用户能从有限的样本量中得到更准确的定量结果。此外,在使用更短的色谱梯度时,ZT Scan DIA能够以低上样量提供与传统DIA方法相当或更好的蛋白质组学性能,使用户能在更短的时间内获得有生物学意义的结果。
20%蛋白数目能提高35%,肽段鉴定数最高能提高54%,定量结果cv20%肽段数目能提高45%。
图5比较了在两种不同混样中,ZT Scan DIA相对于Zeno SWATH DIA在蛋白覆盖度上的提升,能够正常的看到,不但在蛋白和肽段的鉴定数上有提升,大多数蛋白覆盖度都有明显的提高,最高能够达到7倍。
这与之前的结果相一致,即ZT Scan DIA对于低丰度蛋白和肽段的检测有显著提升,来提升了蛋白的覆盖度,而低丰度蛋白的检测在生物标志物的研究中通常更具有挑战性。图6比较了ZT Scan DIA和Zeno SWATH DIA蛋白鉴别判定的结果的假阳性率,相比之下,ZT Scan DIA降低了假阳性率,这是由于增加了Q1扫描的维度,产生了更高质量和特异性的二级谱图,从而为蛋白质组学的研究提供更可靠的结果。